测定意义: 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。 

 测定原理： 碱性环境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。 

 自备仪器和用品： 

 可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。 

 试剂组成和配制： 

 试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。 

 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加60mL蒸馏水充分溶解。 

 试剂三：液体×1瓶，4℃保存。 

 试剂四：粉剂×2支，4℃避光保存。临用前每瓶加入576μL无水乙醇（自备），24 μL蒸馏水充分溶解；现配现用。 

 标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。 

 催化反应： 

 称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。 

 显色反应：

 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。 

 2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸馏水，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后 25℃静置30 min，于 660 nm测定吸光度，记为A空白管。 

 3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL标准液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后 25℃静置30 min，于 660 nm测定吸光度，记为A标准管。 

 4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后 25℃静置30 min，于 660 nm测定吸光度，记为A测定管。 

 注意：空白管和标准管只需测定一次。