测定意义:土壤β-葡萄糖苷酶能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理: 4-羟甲基-7-香豆素(MUB)在 365 nm波长处激发, 能在 470 nm处检测到荧光, 它与某些物质结合后荧光特性消失, 通过酶的水解作用MUB释放出来, 通过检测荧光量来表征酶活性。
自备仪器和用品: 多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。用前加11 mL蒸馏水充分溶解(可50℃震荡溶解)。
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取: 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。按照土壤质量(g):试剂一mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g土壤,加入1mL试剂一),振荡混匀。
测定步骤:
1. 测定管:在震荡条件下取100 μL土壤悬液到EP管中,加入100 μL试剂二,30℃震荡避光培养3 h,从中吸取134 μL到黑色不透光96孔板中,加入66 μL试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长365 nm,测定波长 470nm。
2. 对照管:取100 μL蒸馏水到EP管中,加入100 μL试剂二,30℃震荡避光培养3 h,从中吸取134 μL到黑色不透光96孔板中,加入66 μL试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长365 nm,测定波长 470nm。 ΔA=A测定-A对照
注意:对照管只需测定一次。
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