SMD1168H感受态细胞（化转）

产品储存：-80 ℃保存

产品组成：

注：本菌株的基因型：pep4，表型：pep4-, Mut+。

产品说明：

SMD1168H 是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。

SMD1168H 被推荐用来表达含有 Zeocin 抗性的酵母表达载体重组质粒，例如 pPICZ A, B, C 系列的载体。SMD1168H 基因组中的 Pep4 基因发生突变，造成蛋白水解酶 A 活性的丧失，可以保护表达产物免受降解，促进表达量的提高。

SMD1168H 毕赤酵母适宜的生长温度是 28-30℃，一般使用 30℃培养，温度超过 32℃可能导致细胞的死亡。

使用方法：

1. 取 0.1-5 μg 质粒 DNA（线性化质粒加入量 5-50 μg）和 10 μL 预变性 Carrier DNA，加入到未融化的 100-200μL 感受态细胞上，置于 30 ℃水浴，每隔 15 S 颠倒混匀，直至感受态细胞刚好完全融化（融化后及时取出）。

2. 加入 1.4 mL B2 溶液颠倒混匀。30 ℃水浴 60 min，每隔 20 min 颠倒混匀

3. 3,000 rpm 离心 3 min 弃上清留菌体沉淀，加入 1 mL B3 溶液重悬菌体。

4. 3,000 rpm 离心 3 min 弃上清留菌体沉淀，加入 100 μL B3 溶液重悬菌体。

5. 将 100 μL 菌液全部涂布到相应的平板培养基，30 ℃恒温培养 3-5 天，直至平板出现酵母克隆。

注意事项：

1. 初次使用 Carrier DNA，请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20 ℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻 Carrier DNA。反复冻融 3-5 次后需重新变性 Carrier DNA。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

4. 毕赤酵母适宜的生长温度是 28 至 30℃，温度超过 32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！