YM4271感受态细胞
产品储存:-80 ℃保存,6 个月有效。
产品组成
基因型:
MATa, ura3-52, his3-Δ200, ade2-101, ade5, lys2-801, leu2-3,112, trp1-901, tyr1-501, gal4Δ, gal80Δ, ade5::hisG
产品说明:
YM4271 菌株,MATa 型,可直接转化质粒或与 MATa 型酵母菌株 EGY48、Y187 等通过 mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为:trp1, leu2, ura, 报告基因为:HIS3。可用于酵母双杂,酵母单杂或异源蛋白表达等试验。
使用方法:
1. 取 YM4271 感受态细胞 100 µL 于冰上融化,依次加入预冷的目的质粒 2-5 µg,Carrier DNA(95-100℃,5min,快速冰浴,重复一次)10 µL,PEG/LiAc 500 µL 并吹打几次混匀,30℃水浴 30 min (15min 时翻转 6-8次混匀)。
2. 将离心管置于 42℃水浴 15 min(7.5 min 时翻转 6-8 次混匀)。
3. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清,ddH2O 400 µL 重悬,离心 30s 弃上清。
4. ddH2O 50 µL 重悬,涂板,29℃培养 48-96 h。
5. 筛选培养基可选本公司 SD 系列产品
注意事项:
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。
4. YM4271 菌株对高温敏感,最适生长温度为 27-30℃;高于 31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的 Adenine 被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利用,然而,有些菌株的 ADE2 基因被破坏,Adenine 合成途径受阻;又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常,所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂 YPDA 平板 29℃,48 h 培养可见直径 1 mm 克隆;涂 SD 单缺平板 29℃,48-60 h 培养可见直径 1 mm克隆,涂 SD 双缺平板 29℃,60-80 h 培养可见直径 1 mm 克隆,涂 SD 三缺或四缺平板平板 29℃,80-90 h培养可见直径 1 mm 克隆。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!