R5421感受态细胞

产品储存：-80 ℃保存，6 个月有效。

产品组成

基因型：

MATa ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1 :: pCK64

产品说明： 

R5421 酿酒酵母菌株为 K+/钾离子缺陷型菌株，在文献中也称为 CY162，MATα型，多用于 K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中，也可用于 K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker 为：ura3，leu2，该菌株可以在含有 100mM KCl 的培养基中能正常生长，在含有 5-10mM KCl 的培养基中生长缓慢，当培养基中 KCl 浓度低于 0.5 mM，R5421（CY162）细胞停止生长。R5421 感受态细胞经特殊工艺制作，-80 ℃可保存六个月，pGADT7 质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

使用方法： 

1. 取 R5421 感受态细胞 100 µL 于冰上融化的，依次加入预冷的目的质粒 2-5 µg，Carrier DNA (95-100 ℃，5 min，快速冰浴，重复一次) 10 µL，EG/LiAc 500 µL 并吸打几次混匀，30 ℃水浴 30 min (15 min 时翻转6-8 次混匀)。

2. 将管放 42 ℃水浴 15 min (7.5 min 时翻转 6-8 次混匀)。

3. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清，ddH2O 400 µL 重悬，离心 30 s 弃上清。

4. ddH2O 50 µL 重悬，涂板，29 ℃培养 48-96 h。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

4. R5421 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为 27-30 ℃；高于 31 ℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的 Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的 ADE2 基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂 YPDA 平板 29 ℃，48 h 培养可见直径 1 mm 克隆；涂 SD 单缺平板 29℃，48-60 h 培养可见直径 1 mm克隆，涂 SD 双缺平板 29℃，60-80 h 培养可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺平板平板 29 ℃，80-90h 培养可见直径 1 mm 克隆。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！