EGY48感受态细胞

产品储存：-80 ℃保存，6 个月有效。

产品组成

基因型: 

MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2 

产品说明： 

EGY48 菌株是 LexA 系统酵母双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation marker 为：his3，trp1，ura3，报告基因为：LEU2；报告基因 UAS (上游激活序列)来源于 LexA op(x6)，只有当 Bait 和 Prey 互作时才能启动 LEU2 表达。EGY48-LexA 酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒 pLexA 的筛选标志为 HIS3，用于表达DNA-BD(来自原核的 202 个氨基酸残基组成的 LexA 蛋白)与目标蛋白 (Bait)的融合蛋白；质粒 pB42AD 的筛选标志为 TRP1，用于表达 AD(来自疱疹病毒的 88 个氨基酸残基组成的 B42AD 蛋白)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白；报告质粒 p8op-LacZ 的筛选标志为 URA3，报告基因为 LacZ，报告基因 UAS 来源于 LexAop(x6)，只有当 Bait 和 Prey 互作时才能启动 LacZ 表达。EGY48 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存六个月，pGBKT7 质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

使用方法：

1. 取 100 μl 冰上融化的 EGY48 感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒 2-5ug，Carrier DNA（95-100 度 5min, 快速冰浴，重复一次）10 ul ，PEG/LiAc 500ul 并吸打几次混匀，30 度水浴 30 分钟（15 min 时翻转 6-8

次混匀）。

2. 将管放 42 度水浴 15min （7.5 min 时翻转 6-8 次混匀）。

3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清，ddH2O 400ul 重悬，离心 30s 弃上清。

4. ddH2O 50ul 重悬，涂板,29℃培养 48-96h。

5. 筛选培养基可选本公司 SD 系列产品，

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

4. EGY48 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为 27-30℃；高于 31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的 Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的 ADE2 基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole(AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂 YPDA 平板 29℃，48 h 培养可见直径 1 mm 克隆；涂 SD 单缺平板 29℃，48-60 h 培养可见直径 1 mm克隆，涂 SD 双缺平板 29℃，60-80 h 培养可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺平板平板 29℃，80-90 h培养可见直径 1 mm 克隆。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！