非变性酵母蛋白提取试剂盒

储存条件：RT，未开封有效期 24 个月。

产品内容：

产品说明：

本产品通过使用玻璃珠震荡法破壁结合化学法破碎酵母细胞壁，适用于多种酵母菌的培养物（包括菌

液或平板菌落）。提取液不含蛋白变性剂，提取过程无需高温处理，提取的总蛋白可用于蛋白活性检测相

关实验。该试剂盒提取的蛋白可以用 Bradford 定量试剂盒（SK1060）或 BCA 定量试剂盒（SK1070）进行

蛋白定量。

准备步骤：

将洗涤液和提取液置于冰上预冷。

操作步骤（小提）：

1. 5,000 rmp，4 ℃离心 5 min，收集酵母菌液（1-5mL）细胞沉淀（酵母菌液 OD 值 0.5-2.0）。

2. 加入 1 mL 预冷的洗涤液，震荡混匀。5,000 rmp，4 ℃离心 5 min 沉淀酵母细胞，弃上清。

3. 用 100 μL 预冷提取液悬浮酵母细胞，并快速转移到 1.5 mL 塑料离心管中。

4. 加入 0.5 g 的玻璃珠，在旋涡震荡器上剧烈震荡混合 5-10 min（间歇冰浴冷却）。

5. 用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。

6. 再加入 100 μL 预冷提取液到剩余的玻璃珠中，稍加震荡，再次回收提取液。

7. 合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。

8. （可选步骤）12,000 rmp，4 ℃离心 15 min，上清含可溶性蛋白质，沉淀含不溶性蛋白质。

9. 提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。

操作步骤（大提）：

1. 5,000 rmp，4 ℃离心 5 min，收集酵母菌液（100-500mL）细胞沉淀（酵母菌液 OD 值 0.5-2.0）。

2. 加入 50 mL 预冷的洗涤液，震荡混匀。5,000 rmp，4 ℃离心 5 min 沉淀酵母细胞，弃上清。重复洗涤一次。

3. 用 10 mL 预冷提取液悬浮酵母细胞，并快速转移到 50 mL 塑料离心管中。

4. 加入 5 g 的玻璃珠，在旋涡震荡器上剧烈震荡混合 5-10 min（期间可以将样品置于-80 冰箱速冻 5min 后继续震荡，可以提高裂解效率）。

5. 用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。

6. 再加入 10 mL 预冷提取液到剩余的玻璃珠中，稍加震荡，再次回收提取液。

7. 合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。

8.（可选步骤）12,000 rmp，4 ℃离心 15 min，上清含可溶性蛋白质，沉淀含不溶性蛋白质。

9. 提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！