细菌RNA提取试剂盒

储存条件：4℃保存，保质期 1 年。

产品内容：

产品说明：

细菌 RNA 快速提取试剂盒适用于革兰氏阴性菌 RNA 提取，可以简单快速地纯化高质量的总RNA。纯化好的总 RNA 可用于 mRNA 分离，RT-PCR，Northern 杂交等下游分子实验。如提取革兰氏阳性菌 RNA 建议用真菌 RNA 快速提取试剂盒提取。

自备试剂：

氯仿

（一）菌体裂解：

1. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 1-3 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短，所以必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。

2. 吸尽液体培养基，加入 0.5mL 裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀后室温放置 3 min，确保细菌全部裂解，没有块状物。

（二）样品纯化：

1. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加入 0.2 倍体积的自备氯仿(0.5mL 裂解液需 0.1mL 氯仿)，振荡器上充分振荡混匀 30 s。

2. 12,000rpm 室温离心 3 min，吸取上清到新的离心管中，建议取 400-450uL 上清。

3. 在上清中加入 200-225uL 的无水乙醇，颠倒混匀，加入 RNA 纯化柱中（如有絮状物或沉淀产生，

一并加入纯化柱中）。12,000rpm 离心 1min，弃穿透液。

4. 在纯化柱中加入 0.5mL RNA 洗涤液，室温 12,000rpm 离心 30 s，弃穿透液。

（三）RNA 收集：

1. 将结合有 RNA 的纯化柱 12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。

2. 弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中，加入30-50uL RNA溶解液，室温放置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 RNA。得到的 RNA 可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。

3. 如果要提高 RNA 产量，加入 30-50uLRNA 溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高RNA 浓度，使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。

注意：建议 RNA 用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的 28S和 18S 条带，以及中间弥散的 mRNA 条带，其中 28S 条带是 18S 条带亮度的 1.5-2 倍。有时还包括跑在最前面的较暗的 5S 条带。A260/A280 比值 1.8~2.0 对应 RNA 纯度 90-100%之间。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！