血液RNA提取试剂盒

保存条件：4℃保存，保质期 2 年。

产品内容：

产品说明：血液 RNA 快速提取试剂盒适用于从动物血液样品中快速提取总 RNA。

纯化好的总 RNA 可用于 mRNA 分离，RT-PCR，Northern 杂交等下游分子实验。

抗凝剂的使用，不影响 RNA 的提取。

操作步骤：（样品裂解，样品纯化，RNA 收集）

离心条件均优先选择 4℃，室温离心也可以。

一：样品裂解

1. 12,000 rmp 室温离心 3 min 收集 0.2-1.5 mL 抗凝全血的细胞沉淀。

2. 在血细胞沉淀中，加入 1mL 的裂解液，用枪头充分吹打混匀。

注意：如离心后细胞沉淀的量目测大于 200uL ，建议只留取 200uL 沉淀做裂解，否则会影响裂解效果。

二：样品纯化

1. 在上述裂解液中加入 0.3 mL 的 RNA 纯化液，剧烈震荡 30 s。

2. 再加入 0.2 mL 的氯仿，剧烈震荡 30 s。

3. 12,000rpm 离心 3-5min，取上清到新的 2mL 的离心管中（避免触及分层界面，下层会有大量 DNA 和蛋白污染，避免污染。）

4. 上清中加入等体积的 RNA 结合液，颠倒混匀，分多次加入同一个 RNA 纯化柱中（如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中）。12,000rpm 离心 1min，弃穿透液。

5. 在纯化柱中加入 0.5mL RNA 洗涤液，室温 12,000rpm 离心半分钟，弃穿透液。重复洗涤一次。（洗涤液使用后拧紧瓶盖，防止挥发）

三：RNA 收集

1. 将结合有 RNA 的纯化柱 12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。（乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验，或者适当延长离心时间，将有助于乙醇的去除）

2. 弃收集管，将柱芯转移到 1.5mL 的 RNase-free 离心管中（自备），加入30-50uLRNA 溶解液，室温放置 1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟洗脱 RNA。得到的 RNA 可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。

3. 如果要提高 RNA 产量，加入 30-50uLRNA 溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高 RNA 浓度，使用第一次的洗脱液 加回到吸附柱中重复洗脱。

注意：建议 RNA 用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的 28S 和 18S 条带，以及中间弥散的 mRNA 条带，其中 28S 条带是18S 条带亮度的 1.5-2 倍。有时还包括跑在最前面的较暗的 5S 条带。如果条带不清晰或者弥散，可能是提取过程中或者材料保存过程中 RNA 发生了降解。小于200bp 的 RNA 分子不能有效结合到吸附柱上。A260/A280 比值 1.8~2.0 对应 RNA纯度 90-100%之间。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！