Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
储存条件:BSA 蛋白标准液-20 ℃保存,其它室温保存,保质期 12 个月。
产品内容:
产品说明:
Folin 酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步用此络合物还原 Folin 试剂,样品溶液变为深蓝色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。蛋白质定量范围为5-100 μg/mL。Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
使用说明:
制备工作液
1. 根据用量,取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 Folin 酚甲试剂 B 按 50:1 混合,即为 Folin 酚甲试剂,有效期 24小时。
2. 根据用量,取适量 BSA 标准液,用 PBS 稀释液稀释 10 倍至浓度 0.5 mg/mL,即为 BSA 蛋白标样。试管法(分光光度计法)
1. 将 BSA 蛋白标准样按 0、2、4、6、8、12、16、20 μL 加到 96 孔板中,加 PBS 稀释液补足到 20 μL。
2. 将蛋白样品作适当稀释(建议多做几个梯度),加 20 μL 到 96 孔板中。
3. 将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入 200 μL,轻轻震动混匀,室温放置 10 min。
4. 每孔加入 Folin 酚乙试剂 20 μL,迅速混匀,室温放置 30 min。用酶标仪测定 A650 光度值,绘制标准曲线并计算蛋白浓度。
注意事项:
1. Folin 酚乙试剂只在酸性条件稳定,故当其加到碱性的铜-蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏前,还原反应即能发生。
2. 为了保证反应进行完全,反应可在 25-30 ℃水浴中进行,反应 30 min 后准时比色。
3. 还原物质会干扰本实验。
4. Lowry 法的呈色物质组成尚未确定,它在红外区呈现较宽吸收峰。在 550-750 nm 间吸光度均与蛋白质浓度成正比。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!