非变性PAGE制胶及电泳试剂盒（常规蛋白）

储存条件：参照产品组成储存条件，保质期1年。

产品组成：

注意：

1. 过硫酸铵（APS）为结晶性粉末，2-8 ℃储存，使用前每支加入 1 mL 蒸馏水即为 10% APS 溶液，现配现用最佳，溶液用后-20 ℃可储存 2 个月。APS 如出现严重结块，即已变质。

2. 将5×tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉）加入到900mL的蒸馏水中，搅拌溶解之后，定容到1L，即得5×电泳液，常温可保存半年。使用前用蒸馏水稀释到1×。

产品简介：

本试剂盒提供非变性 PAGE 凝胶制备以及电泳全套试剂。可以根据需求配制各种浓度的非变性分离胶，同时提供 4×非变性蛋白上样液（需-20℃保存）和 5×非变性电泳缓冲液用以满足不同分子量的酸性蛋白电泳实验，无需再准备试剂，使用方便，经济实惠。如需小量制备多种浓度变性分离胶请选购 SK6010 产品。

操作步骤：（以 0.75mm 厚 mini 胶为例）

一、灌制分离胶

1．参照凝胶模具说明书，装配好模具。

2．取相应体积的 30% Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水（参照表 1）在小烧杯或试管中混合。

3．加入 10% APS 溶液和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．注入模具（留少许以判断凝胶状态），避免产生气泡，凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约 1.5 cm 或距梳齿

0.5 cm，轻轻加入 1 mL 水覆盖封胶，使分离胶表面保持平整。

5．静置 30-60 分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

二、灌制浓缩胶

1．倒掉覆盖在分离胶上的水层。

2．将相应体积的 30% Acr-Bis（29:1）、浓缩胶缓冲液和双蒸水（参照表 2）在一个小烧杯或试管中混合。

3．加入 10% APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面（留少许以判断凝胶状态，避免产生气泡，直至前玻璃板的顶端。

5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置 30-60 分钟，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。

7．进行常规电泳操作。使用 Tris 甘氨酸电泳液建议电泳条件：初始电压 80V，约 30 分钟，样品进入分离胶后，电压调至 120V，约 1 小时，样品抵达凝胶底部停止电泳。

注意事项：

1. APS 溶液常温不稳定，取用后立即放回-20 ℃冰箱；若发现凝胶时间延长，应更换 APS 溶液。

2. PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关；可通过增加 50%-100% 的 APS 及 TEMED的用量，加快 PAGE 凝胶的聚合速度，但凝胶聚合过快不利于操作。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

5. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！