SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
储存条件:Acr-Bis 溶液 2-8 ℃储存,其它常温储存。有效期 1 年。
产品组成:
注意:过硫酸铵(APS)为结晶性粉末,2-8 ℃储存,使用前每支加入 1 mL 蒸馏水即为 10% APS 溶液,现配现用最佳,溶液用后-20 ℃可储存 2 个月。APS 如出现严重结块,即已变质。
产品介绍:
本产品包括 SDS-PAGE 凝胶制备所需全部试剂,只需自备蒸馏水,即可制备各种浓度的变性 PAGE凝胶,方便、快捷、安全、实惠。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中均已加入 SDS,使用时无需额外加入,分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置 2-8 ℃可能出现絮状,为 SDS 析出,常温放置一会溶液恢复澄清后继续使用。因为制备凝胶浓度不同,本品只给出规格仅为大概制胶数量。如需购买固定胶浓度的试剂盒请选择 SK60106/08/10/12/15 等货号产品。
操作步骤:(以 0.75mm 厚 mini 胶为例)
一、灌制分离胶
1.参照凝胶模具说明书,装配好模具。
2.取相应体积的 30% Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水(参照表 1)在小烧杯或试管中混合3.加入 10% APS 溶液和 TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.注入模具(留少许以判断凝胶状态),避免产生气泡,凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约 1.5 cm 或距梳齿 0.5 cm,轻轻加入 1 mL 水覆盖封胶,使分离胶表面保持平整。
5.静置 30-60 分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
二、灌制浓缩胶
1.倒掉覆盖在分离胶上的水层。
2.将相应体积的 30% Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水(参照表 2)在一个小烧杯或试管中混合。
3.加入 10% APS 和 TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面(留少许以判断凝胶状态),避免产生气泡,直至前玻璃板的顶端。
5.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6.静置 10~20 分钟,待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,避免破坏加样孔。
7.进行常规电泳操作。使用 Tris 甘氨酸电泳液建议电泳条件:初始电压 80V,约 30 分钟,样品进入分离胶后,电压调至 120V,约 1 小时,样品抵达凝胶底部停止电泳。
注意事项:
1. APS 溶液常温不稳定,取用后立即放回-20 ℃冰箱;若发现凝胶时间延长,应更换 APS 溶液。
2. PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关;可通过增加 50%-100%的 APS 及TEMED 的用量,加快 PAGE 凝胶的聚合速度,但凝胶聚合过快不利于操作。
3. 在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
5. 丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿戴实验服和一次性手套。
附表 1. 配制 5 mL SDS-PAGE 分离胶(组份体积单位 mL)
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!