在线客服
热线电话

微信公众号

企业微信

微信小程序
我的购物车 0

线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) LM449P

销售价
¥ 3990.00 /盒
  • 累计评价

    0
  • 累计销量

    0
配送至
请选择地址
可配送 快递:免邮
服务
联迈生物官方商城发货并提供售后服务

规格
数量
+ -
库存24盒
二维码图片
商家服务
专业包装 正品保证
快乐服务 售后无忧
会员特权 优惠不断
个人信息 严格保护

看了又看

  • 转基因元件TG7探针法荧光定量PCR试剂盒 LM15-8GMO2780

    ¥3990.00

  • 转基因元件TOCS探针法荧光定量PCR试剂盒 LM15-8GMO2770

    ¥3390.00

  • 线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) LM449P

    ¥3990.00

线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

产品介绍:线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-茭光探针法)用特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对线粒体DNA(ntDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)RNA进行体外扩增检测,不同批号的试剂盒组分不可交互使用,此试剂盒仅供科研使用。

()RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中,按100g:3ml的比例加入Trizol试剂,严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)Trizol(按3ml/100mg组织,宁多勿少)置于玻璃匀浆器中匀浆后,冰浴10-15min
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g离心10min
(3)上清液移至另一EP管中,室温放置10-15min
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol,振荡15s,室温置5min
(5)4ºC 12000g离心15min
(6)仔细吸取上层水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol,振摇,置室温10min
(8)4ºC 12000g离心10minEP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清,纸巾吸干,加入75%乙醇1ml,振摇,充分洗涤沉淀。
(10)4ºC 11000g离心5min
(11)吸尽乙醇,空气干燥10min(可离心加快干燥,尽量吸尽离心液体)。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混匀),-20ºC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度,所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0
(14)取所提取的总RNA1%琼脂糖凝胶电泳,显示出清晰的28s18s两条rRNA
线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
()逆转录反应
DEPC 9ul
dig primer 1ul
5×buffer 4ul
10M dNTPmix 2ul
RNA酶抑制剂 1ul
RNA 2ul 70ºC 5min
逆转录酶 1ul
20ul 42ºC 60min(+?)
70ºC 10min
4ºC ∞
()PCR反应
DEPC水(可用高压双蒸水) 17.5ul
10×Taq buffer 2.5ul
MgCl2 2.0ul
10M dNTP Mix 0.5ul
上游引物 0.5ul
下游引物 0.5ul
Tap(5u/ul) 0.5ul
CDNA 1.0ul
25ul
PCR仪参数设置
94 ºC
5min 94 ºC ? ºC 72 ºC
30s 45s 45s 72ºC 4ºC
7min ∞
线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
()电泳
(1)20ml 0.5×TBE
0.3-0.4g琼脂糖
煮沸,配成1.5-2.0%琼脂糖凝胶(RNA1.0%
(2)冷切至60 ºC,加入4ulEB,倒入槽中(8孔梳),室温冷切30min
(3)拔梳,加入4ulPCR产物+1ul上样缓冲液
(4)电压100-135V
(5)UVP成像系统观察
试剂配制
5×TBE配制方法(1L计)
Tris-Base 54g
硼酸 27.5g
EDTA 3.72g
加双蒸水至1L
2%琼脂糖凝胶配制方法
琼脂糖 0.4g
0.5×TBE 20ml
EB 4ul
方法的改进版:室温冷切10min,放至4ºC冰箱20min
相关技巧
1、注意反应体系的一致,可分装
2、先P内参,检验CDNA的完整性
3、首先考虑退火温度
4、注意引物的设计
5、若目的条带无法到达指定位置,可先或晚于MAKER电泳
6、通过加量或减量PCR产物来达到灰度的调整
7、必要时可行标本间替代
8、可设计相应大小的内参来达到最终目的
92度水浴箱的妙用

  1. 必要时进行相关技术处理

线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)问题解答
无条带
反应体系错误。重新配置反应体系确保各种试剂加入的量没有问题。
PCR程序出错。检测PCR仪程序是否正确。
DNA胶问题。DNA凝胶电泳时加入阳性对照。
退火温度不合适。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
DNA模板量太少。增加DNA模板量。
引物错误。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
DNA模板中存在抑制剂。确保DNA模板干净
模板有复杂结构。加入DMSO,BSA或者甜菜碱。可尝试递减PCR
PCR产物量过少
退火温度不合适。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
DNA模板量太少。增加DNA模板量。
PCR循环数不足。增加反应循环数。
引物量不足。增加体系中引物含量。
延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。
变性时间过长。变性时间过长会导致DNA聚合酶失活。
DNA模板中存在抑制剂。确保DNA模板干净
有杂带
复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。
引物退火温度过低。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化完全并彻底混匀。
引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
引物量过多。减少反应体系中引物的用量。
模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng
外源DNA污染。确保操作的洁净。
线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)条带弥散
复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。
模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng
酶量过多。减少DNA聚合酶的使用量。
循环数过多。减少反应循环数至30.
引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。
引物错误。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
阴性对照出现条带
试剂,枪头,工作台污染。使用全新的试剂和枪头,对工作台进行清洁。
条带大小与理论不符
污染。使用全新的试剂和枪头,对工作台进行清洁。
模板或引物使用错误。更换引物和模板。
基因亚型。对研究的基因进行序列分析和BLAST研究。


因厂家更改商品包装、场地、附配件等不做提前通知,且每位咨询者购买、提问时间等不同。为此,客服给到的回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!给您带来的不便还请谅解,谢谢!

  • 全部
  • 商品咨询
  • 支付问题
  • 发票及保修