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LightSpeed PacI LM8015REN

LightSpeed PacI

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LightSpeed  PacI

产品简介:

5'...T T A A T T A A...3' 3'...A A T T A A T T...5' 

LightSpeed 快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LightSpeed  快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在 EZ 酶切 Buffer 中具有 100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。

试剂内容:

2022122004041151523

质量控制:

功能活性检测

最适反应温度下,在 20μl 反应体系中,1μl LightSpeed  PacI 能够在 15min 内完全消化 1μg pPacI DNA。

超长时间温育检测

最适反应温度下,将 1μl LightSpeed PacI 与 1μg pPacI DNA 共温育 3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下,使用 1μl LightSpeed PacI 消化底物,回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNALigase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测 

最适反应温度下,将 1μl LightSpeed  PacI 与 1μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态

蓝白斑检测 

使用方法:

1. DNA 快速酶切流程

①在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

2022122004051390424

2022122004052484299

注:本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10× EZ Buffer 加入量可适当减少至 2μL。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
②轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

③37℃温育 15 分 钟 (质粒),或 15~30 分钟(PCR 产物),或 30~60 分 钟 (基因组 DNA);

④80℃温育 20 分钟即可使酶失活,停止反应(可选)。

2. 双酶切或多酶切

①每种快速内切酶的用量为 1μL,并根据需要适当扩大反应体系;

②所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;

③如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

3. 适用于质粒的扩大反应体系

2022122004054129611

注:如果总反应体系大于 20μL,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

 不同 DNA 中的酶切位点数量

2022122004054818687

甲基化修饰影响

2022122004055369152

在不同反应缓冲液中的活性

2022122004061409127

注:活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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