LightSpeed  BglII

产品简介：

5'...AGATCT...3' 3'...TCTAGA...5' 

LightSpeed  快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LightSpeed  快速内切酶具有如下特点：5~15 分钟内即可完成酶切；共用一种酶切 Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在 EZ 酶切 Buffer 中具有 100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

试剂内容：

质量控制：

功能活性检测

最适反应温度下，在 20μl 反应体系中，1μl LightSpeed  BglII 能够在 15min 内完全消化 1μg λDNA。

超长时间温育检测

最适反应温度下，将 1μl LightSpeed BglII 与 1μg λDNA 共同温育 3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下，使用 1μl LightSpeed  BglII 消化底物，回收酶切产物，在 22℃下使用适量 Fast T4 DNALigase 可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测 

最适反应温度下，将 1μl LightSpeed  BglII 与 1μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。

蓝白斑检测 

将含有单一 lacZα基因的载体以 1μl LightSpeed  BglII 消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即 DNA 末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于 1μl LightSpeed 系列 限制酶而言，白色菌落比例应小于 1%。

使用方法：

1. DNA 快速酶切流程

①在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

注：本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× EZ Buffer 加入量可适当减少至 2μL。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
②轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③37℃温育 15 分 钟 （质粒），或 15~30 分钟（PCR 产物），或 30~60 分 钟 （基因组 DNA）；

④80℃温育 20 分钟即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

①每种快速内切酶的用量为 1μL，并根据需要适当扩大反应体系；

②所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；

③如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3. 适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于 20μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

 不同 DNA 中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。