在线客服1号
pBM23 Toposmart 克隆试剂盒
（pBM23 Toposmart Cloning Kit）
货号和规格：LM0279 (20次)
产品信息：
组成 | LM0279 (20次) |
pBM23 Vector (20ng/ml ) | 20ml |
10×Toposmart | 20ml |
Control Insert LacZα | 5ml |
M13F(-47) Primer(使用前加入45ul ddH2O) | 0.1OD |
M13R(-48) Primer(使用前加入45ul ddH2O) | 0.1OD |
保存条件：-20 ℃保存
产品介绍：
pBM23 Toposmart克隆试剂盒利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将片段克隆到载体中。不仅适用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion 和Q5 等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物，也可克隆由Taq、Taqplus、Tth和klenTaq 等DNA聚合酶扩增的带A尾的PCR产物。试剂盒中的pBM23 载体为线性化的质粒。可以用引物M13F(-47)和M13R(-48)进行菌落PCR鉴定阳性克隆。载体不含LacZ基因，不能进行蓝白斑筛选。
产品特点：
（1） 连接反应仅需 5 分钟。
（2） 适用于平末端PCR 产物和带 A 尾的PCR 产物。
（3） 载体采用了新的制备工艺，零背景，无需蓝白斑筛选。
（4） 克隆位点两旁都有 Sma I，适合单酶切鉴定。
（5） 载体的多克隆位点两侧具有SP6 和 T7 RNA 聚合酶启动子序列，可用于体外 RNA转录。
（6） 载体具有氨苄青霉素和卡那霉素双抗性基因。
常见问题分析
重组子克隆菌少，或阳性率低：
（1） 感受态效率低，使用转化效率>5×107cfu/µg 的感受态细胞
（2） 连接反应不需在低温下（如放碎冰上）操作，应该在室温下操作。
（3） PCR 片段加入量太多或太少，按照推荐量加入。
（4） PCR 纯度低，重新扩增或重新纯化 PCR 产物。
（5） PCR 质量低，切胶时在紫外下照射时间长，需重新制备。
（6） PCR 扩增结束后，应该再延伸 5-10 分钟，确保片段延伸完全。
（7） 转化后没有复苏培养，可以加入SOC 或LB，培养 60 分钟。
（8） 克隆基因可能对宿主菌有毒性，比如某些编码膜蛋白和DNA 结合蛋白的基因， 某些启动子和调节序列基因，或含有倒置或串联重复序列的基因，选用室温过夜培养平板。