总巯基测定试剂盒说明书 分光光度法 50 管/24 样 

注 意 ：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 

测定意义： 

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。 

测定原理： 

巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。 

自备实验用品：天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。 

试剂组成和配制：试剂一：液体 40 mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 2 mL×1 瓶，4℃避光保存。 

样品的制备：1. 按照组织质量（g）：水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 

2. 血清，培养液：稀释 5 倍后测定，可取 0.1mL 样本，加入 0.4mL 蒸馏水，混匀，置冰上待测。 

操作步骤： 

1、分光光度计预热 30min，调节波长至 412nm，双蒸水调零。 

2、操作表在 1mL 玻璃比色皿中加入如下试剂

注意事项：最低检出限为 10μmol/L。