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Zucchini Green Mottle Mosaic Virus(ZGMMV)南瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCR试剂盒 LM85230d

Zucchini Green Mottle Mosaic Virus(ZGMMV)

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南瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCR试剂盒

Zucchini Green Mottle Mosaic Virus(ZGMMV)

 

产品及特点 :

它具有下列特点:

1. 一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2. 根据南瓜绿斑驳花叶病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。

规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黄盖)

试剂二

MMLV-Taq Mix

75 μL(红盖)

试剂三

超纯水

1 mL(亮黄盖)

试剂四

南瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCR 引物混合液

100 μL(白盖)

试剂五

南瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCR 阳性对照

(1×10E8 拷贝/μL)

50 μL(黄盖)

试剂六

使用手册

1 份

注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的

DNA 片段作为阳性对照。 

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA。

使用方法 一、样品 RNA 的制备 

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 南瓜绿斑驳花叶病毒PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。

二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)  

3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

成份

N+2 个

样品管

RT-PCR阴性对照

RT-PCR阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

 4 μL

4 μL

4 μL

南瓜绿斑驳花叶病毒 RT-PCR 引物混合液

 2 μL

2μL

2μL

N+2 个制备的 RNA 样品

 12.5μL

--

--

超纯水

--

12.5μL

--

南瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液

--

--

12.5μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:

过程

温度

时间

              逆转录

42℃

30 min

预变性

95℃

5 min

PCR 反应

35 个循环)

95℃

30 sec

58℃

30 sec

72℃

20 sec

最后延伸

72℃

7 min

三、电泳检测 

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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