南瓜黄斑病毒RT-PCR试剂盒
Zucchini Yellow Fleck Virus(ZYFV)
产品及特点 :
它具有下列特点:
1. 一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据南瓜黄斑病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
规格及成分:
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(橘黄盖) |
试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(红盖) |
试剂三 | 超纯水 | 1 mL(亮黄盖) |
试剂四 | 南瓜黄斑病毒RT-PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
试剂五 | 南瓜黄斑病毒RT-PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL(黄盖) |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的
DNA 片段作为阳性对照。
运输及保存: 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂: 样品 RNA。
使用方法 一、样品 RNA 的制备:
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 南瓜黄斑病毒PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系):
3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:
成份 | N+2 个 样品管 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性对照 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
南瓜黄斑病毒RT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2μL | 2μL |
N+2 个制备的 RNA 样品 | 各 12.5μL | -- | -- |
超纯水 | -- | 12.5μL | -- |
南瓜黄斑病毒RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液 | -- | -- | 12.5μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 42℃ | 30 min |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) | 95℃ | 30 sec |
58℃ | 30 sec | |
72℃ | 20 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测:
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!